Pitanje:
Preporučene aplikacije za komercijalna antitijela
walkytalky
2011-12-17 18:29:29 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Komercijalni dobavljači primarnih antitijela za zadane proteinske ciljeve obično navode preporučene aplikacije, za koje se vjerojatno pokazalo da antitijela djeluju. Obično ih koristim za imunofluorescenciju, a moj dojam (koji se doduše može temeljiti na nereprezentativnom uzorku) je da se većina antitijela preporučuje samo za upotrebu s Western Blottingom.

Zašto je to? Je li WB najčešća aplikacija? Najopćenitije? Je li lakše testirati na IF?

I, možda još točnije, koliko ozbiljno treba shvatiti ove preporuke? Ako se antitijelo ne preporučuje za IF, znači li to da vjerojatno neće funkcionirati? Ili da se možda dobro, ali nitko se nije potrudio provjeriti? Ili da gotovo sigurno hoće?

Dva odgovori:
#1
+7
nico
2011-12-18 16:18:27 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Možda im je WB lakše testirati?

Međutim, općenito je moja preporuka provjeriti pružaju li preporuke za papir koristeći ta antitijela i pogledati slike na papiru.

Budite oprezni ukazujući povjerenje slikama dobavljača, vidio sam očito fotošopirane slike na komercijalnim web stranicama. Također uvijek provjerite referentne radove, jer ponekad zapravo ne koriste isti proizvod koji se prodaje ...

Osim toga, prema mom iskustvu, preporučena aplikacija je upravo to: recommended. Protutijelo može raditi i za drugu primjenu. Uz to, imajte na umu da postoji obrazloženje za protutijelo koje djeluje na WB, a ne na IHC, na primjer: perfuzija fiksatorima kao što je PFA promijenit će 3D strukturu ciljnog proteina i može maskirati (ili otkriti) određene epitope, tako da antitijelo može biti više ili manje učinkovito, ovisno o tome s kojim oblikom proteina imate posla (nativni, fiksirani u PFA, fiksni u glutaraldehidu, SDS denaturirani itd.)

#2
+3
Naofumi Kagami
2011-12-22 07:22:32 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Protutijela za WB i za IF imaju bitno različite zahtjeve za strukturu epitopa. Protutijela za WB prepoznaju denaturirane strukture proširene tretmanom SDS-om. Protutijela za IF često će trebati prepoznati nativnu strukturu.

Ovisno o dobavljaču, neki će imati puno antitijela za IF. Predlažem da se malo razgledate.



Ova pitanja su automatski prevedena s engleskog jezika.Izvorni sadržaj dostupan je na stackexchange-u, što zahvaljujemo na cc by-sa 3.0 licenci pod kojom se distribuira.
Loading...