Pitanje:
Kako razbiti nakupine stanica prilikom prolaska?
Rob O'Callahan
2011-12-22 07:55:37 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Radim s HepG2 stanicama i one stvarno vole stvarati nakupine. Čini se da pipetiranje gore-dolje u TrypLE-u nije vrlo učinkovito za njihovo razbijanje.

Rob: može li Google odgovoriti na ovo pitanje? Ako može, vratite se i objavite odgovor na svoje pitanje. Evo natuknice: http://hepg2.com/index.html
Tri odgovori:
#1
+5
Jeremy
2012-01-17 09:40:10 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Otkrivam da nakupine (s HeLa i sličnim vrstama stanica) dobivam samo ako ih predugo ostavim u Trypleu. Općenito ih ostavljam u sobnoj temperaturi (ne vrućem) Trypleu oko 8 minuta, a zatim nagnem posudu pod poklopac, tako da mogu vidjeti "sjaj" stanica na posudi (to se naravno događa u napeu ). Tada probijam sjaj Trypleom pipetrom od 1000 ul koji odlijepi stanice. Općenito su puno skuplje nego ako pustim Tryple da odlijepe stanice.

#2
+3
kasia
2012-01-15 19:52:12 UTC
view on stackexchange narkive permalink

U nekim protokolima za postavljanje primarnih kultura (na primjer iz koštane srži mišića ili endometrija štakora) postoji korak koji zahtijeva probijanje suspenzije stanica kroz veliku iglu kako bi se riješili nakupine. Naravno, ovo nosi visok rizik od oštećenja stanica, pa se umjesto toga ponekad koristi kolagenaza.

Moglo bi biti korisno i oprati stanice PBS-om bez iona prije prolaska i koristiti tripin s EDTA-om. To bi trebalo riješiti barem malo kalcija s ploče, kako bi se spriječilo djelovanje adhezijskih proteina.

#3
+3
Valentinos
2012-02-17 21:28:23 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Skupine stanica koje se ne razdvajaju rigoroznim pipetiranjem mogle bi nastati iz slobodne DNA u suspenziji vaših stanica (tj. ako predugo trippsinizirate). Besplatna DNA privlači stanice koje se sve zajedno vežu stvarajući nakupine.

Dva moguća načina da se riješite tih nakupina:

  1. Centrifugirajte suspenziju svojih stanica na 5000 okretaja u minuti tijekom 2 minute uz ubrzanje (na 4) i koče (na 3) omogućavajući taloženju težih molekula. Zatim aspirirajte ~ 0,5 ml s vrha suspenzije i prebacite u novu tikvicu. Ponovite ako je potrebno.
  2. Koristite DNAse u koncentracijama od 20-100 μg / ml (koncentracija je rezultat osobne uporabe) sve dok ne namjeravate provoditi eksperimente povezane s DNA.

Uvijek se možete vratiti i kupiti novu ampulu stanične linije za koju želite da nakupine ostanu besplatne :)



Ova pitanja su automatski prevedena s engleskog jezika.Izvorni sadržaj dostupan je na stackexchange-u, što zahvaljujemo na cc by-sa 3.0 licenci pod kojom se distribuira.
Loading...